La leishmaniose viscérale (LV), connue sous le nom de kala-azar dans le sous-continent indien, est une maladie parasitaire causée par le protozoaire flagellé Leishmania. Elle peut être mortelle en l'absence de traitement rapide. Le phlébotome Phlebotomus argentipes est le seul vecteur confirmé de la LV en Asie du Sud-Est, où il est contrôlé par pulvérisation intradomiciliaire d'insecticide à effet rémanent (PIIR), un insecticide de synthèse. L'utilisation du DDT dans les programmes de lutte contre la LV a entraîné l'apparition de résistances chez les phlébotomes, ce qui a conduit à son remplacement par l'insecticide alpha-cyperméthrine. Cependant, l'alpha-cyperméthrine ayant un mode d'action similaire à celui du DDT, le risque de résistance chez les phlébotomes augmente en cas de stress induit par une exposition répétée à cet insecticide. Dans cette étude, nous avons évalué la sensibilité des moustiques sauvages et de leur descendance F1 à l'aide du test biologique en flacon du CDC.
Nous avons collecté des moustiques dans 10 villages du district de Muzaffarpur, dans l'État du Bihar, en Inde. Huit villages continuaient d'utiliser des insecticides à haute efficacité.cyperméthrinePour la pulvérisation à l'intérieur des habitations, un village a cessé d'utiliser la cyperméthrine à forte concentration, et un autre village ne l'a jamais utilisée. Les moustiques collectés ont été exposés à une dose diagnostique prédéfinie pendant une durée déterminée (3 μg/ml pendant 40 min), et le taux d'inhibition et de mortalité a été enregistré 24 h après l'exposition.
Le taux de mortalité des moustiques sauvages variait de 91,19 % à 99,47 %, et celui de leur génération F1 de 91,70 % à 98,89 %. Vingt-quatre heures après l'exposition, la mortalité des moustiques sauvages variait de 89,34 % à 98,93 %, et celle de leur génération F1 de 90,16 % à 98,33 %.
Les résultats de cette étude indiquent qu'une résistance peut se développer chez P. argentipes, ce qui souligne la nécessité d'une surveillance et d'une vigilance continues pour maintenir le contrôle une fois l'éradication réalisée.
La leishmaniose viscérale (LV), connue sous le nom de kala-azar dans le sous-continent indien, est une maladie parasitaire causée par le protozoaire flagellé Leishmania et transmise par la piqûre de phlébotomes femelles infectées (Diptera : Myrmecophaga). Les phlébotomes sont le seul vecteur confirmé de la LV en Asie du Sud-Est. L’Inde est sur le point d’atteindre l’objectif d’élimination de la LV. Cependant, pour maintenir de faibles taux d’incidence après l’éradication, il est essentiel de réduire la population de vecteurs afin de prévenir toute transmission potentielle.
En Asie du Sud-Est, la lutte contre les moustiques repose sur la pulvérisation intradomiciliaire d'insecticides de synthèse. Le comportement discret des pattes argentées en fait une cible privilégiée pour ce type de pulvérisation [1]. En Inde, la pulvérisation intradomiciliaire de dichlorodiphényltrichloroéthane (DDT) dans le cadre du Programme national de lutte contre le paludisme a eu des retombées positives importantes sur les populations de moustiques et a permis de réduire significativement les cas de leishmaniose viscérale [2]. Ce contrôle inattendu de la leishmaniose viscérale a incité le Programme indien d'éradication de la leishmaniose viscérale à adopter la pulvérisation intradomiciliaire comme méthode principale de lutte contre les pattes argentées. En 2005, les gouvernements de l'Inde, du Bangladesh et du Népal ont signé un protocole d'accord visant à éliminer la leishmaniose viscérale d'ici 2015 [3]. Les efforts d'éradication, combinant lutte antivectorielle et diagnostic et traitement rapides des cas humains, devaient entrer dans leur phase de consolidation en 2015, un objectif ensuite reporté à 2017, puis à 2020 [4]. La nouvelle feuille de route mondiale pour éliminer les maladies tropicales négligées comprend l’élimination de la LV d’ici 2030.[5]
Alors que l'Inde entre dans la phase post-éradication du BCVD, il est impératif de veiller à ce qu'une résistance significative à la bêta-cyperméthrine ne se développe pas. Cette résistance s'explique par le fait que le DDT et la cyperméthrine ont le même mécanisme d'action, ciblant la protéine VGSC [21]. Ainsi, le risque de développement d'une résistance chez les phlébotomes pourrait être accru par le stress induit par une exposition régulière à la cyperméthrine, un insecticide très puissant. Il est donc essentiel de surveiller et d'identifier les populations de phlébotomes potentiellement résistantes à cet insecticide. Dans ce contexte, l'objectif de cette étude était de suivre la sensibilité des phlébotomes sauvages en utilisant les doses diagnostiques et les durées d'exposition déterminées par Chaubey et al. [20]. Ces auteurs ont étudié P. argentipes dans différents villages du district de Muzaffarpur, dans l'État du Bihar (Inde), où des systèmes de pulvérisation intérieure continus à base de cyperméthrine étaient utilisés. Le statut de sensibilité des P. argentipes sauvages provenant de villages ayant cessé d'utiliser des systèmes de pulvérisation intérieure traités à la cyperméthrine (anciens villages IPS) et de ceux n'ayant jamais utilisé de systèmes de pulvérisation intérieure traités à la cyperméthrine (villages non-IPS) a été comparé à l'aide du bioessai en bouteille du CDC.
Dix villages ont été sélectionnés pour l'étude (Fig. 1 ; Tableau 1). Huit d'entre eux avaient des antécédents de pulvérisation continue de pyréthroïdes de synthèse (hyperméthrine) à l'intérieur des habitations (désignés comme villages « hyperméthrine continue ») et avaient enregistré des cas de leishmaniose viscérale (au moins un cas) au cours des trois dernières années. Parmi les deux villages restants, l'un, n'ayant pas mis en œuvre de pulvérisation de bêta-cyperméthrine à l'intérieur des habitations (village sans pulvérisation), a été choisi comme village témoin, et l'autre, ayant pratiqué une pulvérisation intermittente de bêta-cyperméthrine (village avec pulvérisation intermittente/ancien village avec pulvérisation), a également été sélectionné comme village témoin. La sélection de ces villages a été effectuée en coordination avec le Département de la santé et l'équipe chargée de la pulvérisation à l'intérieur des habitations, et a validé le microplan d'action relatif à la pulvérisation à l'intérieur des habitations dans le district de Muzaffarpur.
Carte géographique du district de Muzaffarpur montrant l'emplacement des villages inclus dans l'étude (1 à 10). Localisation des villages : 1, Manifulkaha ; 2, Ramdas Majhauli ; 3, Madhubani ; 4, Anandpur Haruni ; 5, Pandey ; 6, Hirapur ; 7, Madhopur Hazari ; 8, Hamidpur ; 9, Noonfara ; 10, Simara. La carte a été réalisée à l'aide du logiciel QGIS (version 3.30.3) et du fichier Shapefile Open Assessment.
Les flacons utilisés pour les expériences d'exposition ont été préparés selon les méthodes décrites par Chaubey et al. [20] et Denlinger et al. [22]. Brièvement, des flacons en verre de 500 mL ont été préparés la veille de l'expérience. La paroi interne de chaque flacon a été enduite de l'insecticide indiqué (la dose diagnostique d'α-cyperméthrine était de 3 μg/mL) par application d'une solution acétonique de l'insecticide (2,0 mL) sur le fond, les parois et le bouchon. Chaque flacon a ensuite été séché sur un rouleau pendant 30 min. Durant ce temps, le bouchon a été dévissé lentement pour permettre l'évaporation de l'acétone. Après 30 min de séchage, le bouchon a été retiré et le flacon a été agité jusqu'à évaporation complète de l'acétone. Les flacons ont ensuite été laissés ouverts pour sécher toute la nuit. Pour chaque répétition de l'expérience, un flacon, servant de témoin, a été enduit de 2,0 mL d'acétone. Tous les flacons ont été réutilisés au cours des expériences après un nettoyage approprié selon la procédure décrite par Denlinger et al. et l’Organisation mondiale de la santé [ 22 , 23 ].
Le lendemain de la préparation de l'insecticide, 30 à 40 moustiques femelles sauvages, prélevés dans les cages et placés dans des flacons, ont été délicatement introduits dans chaque flacon. Un nombre sensiblement identique de mouches a été utilisé pour chaque flacon contenant l'insecticide, y compris le témoin. Cette procédure a été répétée au moins cinq à six fois dans chaque village. Après 40 minutes d'exposition à l'insecticide, le nombre de mouches tuées a été enregistré. Toutes les mouches ont été capturées à l'aide d'un aspirateur mécanique, placées dans des récipients en carton d'un demi-litre recouverts d'un filet fin, puis incubées séparément dans des conditions d'humidité et de température identiques à celles des colonies non traitées, avec la même source de nourriture (boules de coton imbibées d'une solution de sucre à 30 %). La mortalité a été enregistrée 24 heures après l'exposition à l'insecticide. Tous les moustiques ont été disséqués et examinés afin de confirmer leur espèce. La même procédure a été appliquée aux mouches de la génération F1. Les taux de mortalité et d'inactivation ont été enregistrés 24 heures après l'exposition. Si la mortalité dans les flacons témoins était inférieure à 5 %, aucune correction n'a été appliquée aux réplicats. Si la mortalité dans le flacon témoin était comprise entre 5 % et 20 %, la mortalité dans les flacons de test de cette réplique était corrigée à l'aide de la formule d'Abbott. Si la mortalité dans le groupe témoin dépassait 20 %, le groupe de test entier était exclu [24, 25, 26].
Mortalité moyenne des moustiques P. argentipes capturés dans la nature. Les barres d'erreur représentent les erreurs standard de la moyenne. L'intersection des deux lignes horizontales rouges avec le graphique (90 % et 98 % de mortalité, respectivement) indique la fenêtre de mortalité dans laquelle une résistance peut se développer.[25]
Mortalité moyenne de la descendance F1 de P. argentipes capturés à l'état sauvage. Les barres d'erreur représentent l'erreur standard de la moyenne. Les courbes intersectées par les deux lignes horizontales rouges (90 % et 98 % de mortalité, respectivement) représentent l'intervalle de mortalité au-delà duquel une résistance peut se développer [25].
Dans le village témoin (Manifulkaha), les moustiques non traités par pulvérisation intra-domiciliaire se sont révélés très sensibles aux insecticides. La mortalité moyenne (± erreur standard) des moustiques capturés dans la nature, 24 h après l'inactivation et l'exposition, était respectivement de 99,47 ± 0,52 % et 98,93 ± 0,65 %, et la mortalité moyenne de la descendance F1 était respectivement de 98,89 ± 1,11 % et 98,33 ± 1,11 % (tableaux 2 et 3).
Les résultats de cette étude indiquent que les phlébotomes à pattes argentées peuvent développer une résistance au pyréthroïde de synthèse (PS) α-cyperméthrine dans les villages où ce pyréthroïde est utilisé de façon routinière. En revanche, les phlébotomes à pattes argentées collectés dans des villages non couverts par le programme de pulvérisation intra-domiciliaire (PID) se sont révélés très sensibles. Le suivi de la sensibilité des populations de phlébotomes sauvages est important pour évaluer l'efficacité des insecticides utilisés, car ces informations peuvent contribuer à la gestion de la résistance aux insecticides. Des niveaux élevés de résistance au DDT ont été régulièrement signalés chez les phlébotomes des zones endémiques du Bihar en raison de la pression de sélection historique exercée par la PID utilisant cet insecticide [1].
Nous avons constaté que P. argentipes était très sensible aux pyréthroïdes, et des essais sur le terrain en Inde, au Bangladesh et au Népal ont démontré la grande efficacité entomologique de la pulvérisation intradomiciliaire d'insecticides (PID) lorsqu'elle était utilisée en association avec la cyperméthrine ou la deltaméthrine [19, 26, 27, 28, 29]. Récemment, Roy et al. [18] ont rapporté que P. argentipes avait développé une résistance aux pyréthroïdes au Népal. Notre étude de sensibilité sur le terrain a montré que les phlébotomes à pattes argentées collectés dans des villages non exposés à la PID étaient très sensibles, tandis que les phlébotomes collectés dans des villages ayant bénéficié d'une PID intermittente ou ancienne, ainsi que dans des villages ayant bénéficié d'une PID continue (la mortalité variait de 90 % à 97 %, sauf pour les phlébotomes d'Anandpur-Haruni, dont la mortalité atteignait 89,34 % 24 heures après l'exposition) étaient probablement résistants à la cyperméthrine, un insecticide très efficace [25]. L'une des causes possibles de l'apparition de cette résistance est la pression exercée par les pulvérisations d'insecticides intradomiciliaire de routine (PIR) et les programmes locaux de pulvérisation ciblés, procédures standard de gestion des épidémies de leishmaniose viscérale dans les zones/secteurs/villages endémiques (Procédure opérationnelle standard pour l'investigation et la gestion des épidémies [30]). Les résultats de cette étude suggèrent l'apparition d'une pression de sélection contre la cyperméthrine, un insecticide très efficace. Malheureusement, les données historiques de sensibilité pour cette région, obtenues par le test biologique en flacon du CDC, ne sont pas disponibles à des fins de comparaison ; toutes les études précédentes ont évalué la sensibilité de *P. argentipes* à l'aide de papier imprégné d'insecticide de l'OMS. Les doses diagnostiques d'insecticides des bandelettes de test de l'OMS correspondent aux concentrations d'identification recommandées pour lutter contre les vecteurs du paludisme (*Anopheles gambiae*), et leur applicabilité aux phlébotomes reste incertaine, car ces derniers volent moins fréquemment que les moustiques et passent plus de temps en contact avec le substrat lors du test biologique [23].
Les pyréthroïdes de synthèse sont utilisés au Népal depuis 1992 dans les zones endémiques de leishmaniose viscérale, en alternance avec les pyréthroïdes de synthèse alpha-cyperméthrine et lambda-cyhalothrine pour lutter contre les phlébotomes [31]. La deltaméthrine est également utilisée au Bangladesh depuis 2012 [32]. Une résistance phénotypique a été observée chez les populations sauvages de phlébotomes à pattes argentées dans les zones où les pyréthroïdes de synthèse sont utilisés depuis longtemps [18, 33, 34]. Une mutation non synonyme (L1014F) a été détectée chez les populations sauvages de phlébotomes indiens et associée à une résistance au DDT, suggérant que la résistance aux pyréthroïdes se développe au niveau moléculaire, le DDT et l'alpha-cyperméthrine ciblant le même gène du système nerveux de l'insecte [17, 34]. Par conséquent, une évaluation systématique de la sensibilité à la cyperméthrine et une surveillance de la résistance des moustiques sont essentielles pendant et après l'éradication.
Une limite potentielle de cette étude réside dans l'utilisation du test biologique en flacon du CDC pour mesurer la sensibilité, alors que toutes les comparaisons se basent sur les résultats d'études antérieures réalisées avec le kit de test biologique de l'OMS. Les résultats des deux tests biologiques ne sont pas directement comparables, car le test en flacon du CDC mesure l'inhibition de la réponse immunitaire à la fin de la période diagnostique, tandis que le test avec le kit de l'OMS mesure la mortalité 24 ou 72 heures après l'exposition (cette dernière valeur étant utilisée pour les composés à action lente) [35]. Une autre limite potentielle concerne le nombre de villages ayant bénéficié de la pulvérisation intra-domiciliaire d'insecticides (PID) inclus dans cette étude, comparé à un village n'ayant pas bénéficié de PID et à un village n'ayant pas bénéficié de PID/anciennement PID. Nous ne pouvons pas supposer que le niveau de sensibilité des moustiques vecteurs observé dans certains villages d'un district soit représentatif du niveau de sensibilité dans les autres villages et districts du Bihar. Alors que l'Inde entre dans la phase post-élimination du virus de la leucémie, il est impératif de prévenir l'apparition de résistances significatives. Une surveillance rapide de la résistance chez les populations de phlébotomes de différents districts, blocs et zones géographiques est nécessaire. Les données présentées dans cette étude sont préliminaires et doivent être vérifiées par comparaison avec les concentrations d'identification publiées par l'Organisation mondiale de la santé [35] afin d'obtenir une idée plus précise du statut de sensibilité de P. argentipes dans ces zones avant de modifier les programmes de lutte antivectorielle pour maintenir de faibles populations de phlébotomes et soutenir l'élimination du virus de la leucémie.
Le moustique *Physicos argentipes*, vecteur du virus de la leucose, pourrait présenter des signes précoces de résistance à la cyperméthrine, un insecticide très efficace. Un suivi régulier de la résistance aux insecticides chez les populations sauvages de *P. argentipes* est indispensable pour maintenir l'efficacité épidémiologique des interventions de lutte antivectorielle. La rotation des insecticides ayant différents modes d'action et/ou l'évaluation et l'homologation de nouveaux insecticides sont nécessaires et recommandées pour gérer la résistance aux insecticides et favoriser l'élimination du virus de la leucose en Inde.
Date de publication : 17 février 2025